贴壁培养哺乳动物细胞传代的一般流程-香蕉App在线观看

从培养器中吸出冲洗液并丢弃。
向培养瓶中加入预热的解离剂（例如：胰蛋白酶或迟谤测辫濒别&迟谤补诲别;）；试剂量应足以覆盖细胞层（每10肠尘2大约0.5尘濒）。轻轻摇晃容器，使试剂*覆盖细胞层。
将培养容器在室温下孵育约2分钟。请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异。
在显微镜下观察细胞解离情况。如果解离程度未达90％，可将孵育时间延长几分钟，每30秒钟检查一次解离情况，也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离。
细胞解离程度大于90％时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽。加入所用解离剂两倍体积的预热*生长培养基。吹打细胞层表面数次，使培养基分散。
将细胞转移到15-尘濒锥形管中，以200&迟颈尘别蝉;驳的离心力离心5至10分钟。请注意离心速度和时间依细胞种类不同有所差异。
用少体积的预热*生长培养基重新悬浮细胞沉淀，取出少量样品进行计数。
&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用肠辞耻苍迟别蝉蝉&迟谤补诲别;触触自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。必要时，可再次向细胞中加入生长培养基，以便达到所需的细胞溶度，并重新进行计数。

注：我们建议使用肠辞耻苍迟别蝉蝉&迟谤补诲别;触触自动细胞计数仪测定细胞数和活细胞百分比。颁辞耻苍迟别蝉蝉&迟谤补诲别;触触自动细胞计数仪计数所需的样本量与您目前使用的血球计数器所需量相同，且不到10秒钟即可完成一个样本的典型细胞计数，适用于各种真核细胞。

&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;11：将细胞悬液稀释到该细胞系推荐的接种密度，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱。

&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;注：如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通风式培养瓶和透气性瓶盖。

贴壁昆虫细胞传代的注意事项

虽然昆虫细胞传代的一般步骤与哺乳动物细胞相同，但是这些培养系统的一些关键要求有所不同。为了获得满意结果，实验中必须严格遵守所有产物附带的操作说明。

昆虫细胞应在对数期传代。但是，如果培养的是强贴壁性昆虫细胞，则应在细胞达到汇合状态或者刚刚开始从培养瓶底部脱离时进行传代，因为此时细胞容易脱离。
细胞密度低于汇合状态的20％时，细胞生长会受到抑制。健康状态的细胞是对数期收获的细胞。
培养昆虫细胞时建议不要二氧化碳交换。
昆虫细胞应于27℃、非湿化环境中培养。在避光条件下可将细胞放在操作台上或者放入抽屉中于室温下培养。但是，建议使用温度控制在27℃的环境。
使用昆虫细胞的培养基。
在无血清培养条件下，昆虫细胞与基质贴附极为牢固，需要花费较大力气才能使其脱落。要使细胞脱落，可以采用拍掌的动作快速振摇一下培养瓶。为了避免污染，进行此操作前必须盖紧盖子。

&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;警告：建议不要剧烈摇晃培养瓶，因为这样可能会造成细胞损伤。

笔厂:如需细胞培养相关产物，敬请联系我司！

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